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液相色譜儀樣品檢測要點

點擊次數:3102  更新時間:2015-12-16

 液相色譜儀是一種精度*的檢測儀器,在環境、食品、生物、醫藥行業都有廣泛的應用。本文簡單介紹在液相色譜儀檢測分析樣品的幾個要點。
    流動相比例調整:我國藥品標準中沒有規定色譜柱的長度及填料的粒度,因此每次檢測一個新樣品時都須重新調整流動相,所以建議*次檢驗樣品時配備適量的流動相即可,以免浪費。制備流動相的標準,主峰一般應調至保留時間為6~15分鐘為宜。弱電解質的流動相其重現性更不容易達到,應當注意充分平衡色譜柱。
    樣品配制:樣品溶液從待檢測樣品原料中提取出來之后,須經氮吹儀提純結晶之后配置成一定濃度的溶液,再使 用溶劑過濾器進行過濾處理,方可進入儀器。除此之外,盛放溶液的溶劑避免使用塑料材質,塑料容器常含有高沸點的增塑劑,可能釋放到樣品液中造成污染,而且還會吸留某些藥物,引起分析誤差。某些堿性藥物會被玻璃容器表面吸附,影響樣品中藥物的定量回收,因此必要時應將玻璃容器進行硅烷化處理。
    進樣量:檢測樣品的進樣量一般為10L,主要根據定量環的規格而定,目前多數HPLC系統采用定量環規格有10L、20L和50L,因此應注意進樣量是否一致。
    記錄時間:樣品進入色譜柱后,*次測定時,應先將空白溶劑、對照品溶液及供試品溶液各進一針,并盡量收集較長時間的圖譜(30分鐘以上),以便確定樣品中被分析組分峰的位置、分離度、理論板數及是否還有雜質峰在較長時間內才洗脫出來,確定是否會影響主峰的測定。
    計算:檢測結果的計算主要根據色譜圖,色譜圖是色譜儀定性定量分析的依據。色譜圖的橫軸表示保留時間,可以作為色譜儀器實現定性分析的依據;色譜峰上的極大值是定性分析的依據,而色譜峰所包羅的面積則取決于對應組分的含量,定量分析的依據。需要注意的是,由于有些對照品標示含量的方式與樣品標示量不同,有些是復合鹽、有些含水量不同、有些是鹽基不同或有些是采用有效部位標示,檢驗時須注意。
    液相色譜儀檢測樣品注意事項如下:①流動相濾過后,注意觀察有無肉眼能看到的微粒、纖維,至少過濾三次;②柱在線時,增加流速應以0.1ml/min的增量逐步進行,一般不超過1ml/min,反之亦然。否則會使柱床下塌,叉峰。柱不線時,要加快流速也需以每次0.5ml/min的速率遞增上去(或下來),勿急升(降),以免泵損壞。③安裝柱時,請注意流向,接口處不要留有空隙。④樣品液請注意濾過(注射液可不需濾過)后進樣,注意樣品溶劑的揮發性。⑤測定完畢請用水沖柱1小時,甲醇30分鐘。如果第二天仍使用,可用水以低流速(0.1~0.3ml/min)沖洗(注意水要夠量),不須沖洗甲醇。另外需要特別注意的是:對于含碳量高、封尾充分的柱,應先用含5~10%甲醇的水沖洗,再用甲醇沖洗。⑥沖水的同時請用水充分沖洗柱頭(如有自動清洗裝置系統,則應更換水)。

 

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